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色譜柱使用注意事項及常見的問題
  • 更新日期:2017-02-13     信息來源:本站      瀏覽次數:2052
    •  色譜柱污染常見的現象是保留時間的漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質。污染源可以是:流動相本身,流動相容器,連接管、泵、進樣器和儀器密封墊,以及樣品等。通常通過實驗可判斷污染的來源。樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分,就可能是使保留時間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質。如:配藥中的賦形劑,生化樣品(如血清)中的蛋白及類脂類化合物,食品樣品中的淀粉,環境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加。可以通過使用固相提取(SPE)等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響。避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然。相比之下,找到問題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。
      1、色譜柱的使用說明:  
      (1)色譜柱使用前注意事項:  
      色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。
      (2)流動相:  
      流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。  以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來所使用的流動相。  
      (3)樣品:  
      樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

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